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蜘蛛侠（托比?马奎尔TobeyMaguire饰）在经历了重重考验之后，成为了人人敬仰的正义英雄，抱得美人归。但是，光环下蜘蛛侠，也有自己的心病：他在第一集时放走了小偷导致最亲爱的叔叔被小偷杀死，帕克一直耿耿于怀。

生活顺意的帕克开始变得目中无人，当他再次抓到那个小偷时，残忍地看着他从楼上摔下致死，过后才发现自己惩罚错了人，真凶是“沙人”。当帕克将“沙人”残忍杀死后，帕克心内的阴暗面渐渐在帕克的身体内占据了上风，蜘蛛侠最终演变成邪恶的“毒蜘蛛”！糟糕的是，帕克没有察觉到自身的变化，帕克最终如何摆脱自身的邪恶？

经过先前的几番周折和思想斗争，彼得·帕克终于在章鱼博士手中救出自己的挚爱玛丽·简·沃岑之后，平衡了在心中冲突许久的“爱情”与“作为蜘蛛侠责任感”之间的矛盾。此后，渐渐进入平静的纽约城以及众多喜爱蜘蛛侠的人们也更加开始喜欢这位“蜘蛛英雄”了。而沉浸在幸福中的彼得则每日充分享受着《号角日报》的记者工作，另外，彼得更是时刻会以“蜘蛛侠”的身份及时出现于那些敢于冒犯法律的街头罪犯们的面前。

彼得的好友哈里·奥斯伯恩在同样经历了一系列变故之后，终于察觉到蜘蛛侠的身份原来是自己多年的好友。百感交集的哈里始终抵不过失去父亲巨大痛苦的纠缠，发誓有一天要报杀父之仇。而偶然间，在父亲密室里发现“绿怪”的战斗装备，新一代“加强版绿怪”就此诞生。

罪犯弗林特·马克侥幸从监狱中逃脱，并在偶然的事故之后，变成了威力巨大的“沙人怪”。而当彼得得知此人与杀死叔父本·帕克的凶手有着莫大的联系时，更燃起了他复仇的怒火——发誓要尽快抓捕“沙人”归案。而强悍的“沙人”自然也不会轻易束手就擒。

再次与恶人们大打出手的蜘蛛侠又面临危机——一个神秘外星生物降临地球，偏巧附着在大侠的战衣上。原本红蓝相间的帅气“蜘蛛”，瞬间化作邪恶上身的黑色蜘蛛。“黑暗”瞬息间开始对彼得的思想进行着无情的攻击与拷问。

正当彼得·帕克对玛丽·简的爱愈发深刻，且两人的爱情即将有所成果时，又一个可爱的女孩格温·斯塔茜的“及时”出现使原本顺利发展的爱情，再次陷入麻烦之中。

此时，饱受爱恨折磨的彼得·帕克再也无法忍受“黑色蜘蛛皮”的纠缠，便一怒之下将其丢弃。恰巧，帕克的同行，正经受着失业与失去妻子双重打击的埃迪·布鲁克“有幸”得到了黑色蜘蛛服。就此，蜘蛛侠的又一大劲敌——“毒液”亦轰然诞生。

仇恨就像毒药，慢慢的会让你的灵魂变得丑恶。

我们都是罪人，没有真正的对错之分